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VALUTAZIONE DENSITOMETRICA DEL TRACCIATO SIEROPROTEICO 2

VALUTAZIONE DEL TRACCIATO SIEROPRO-TEICO TRAMITE ISPEZIONE VISIVA 4

EVIDENZIAZIONE E RICONOSCIMENTO DELLE COMPONENTI MONOCLONALI NEL SIERO E NELLE  URINE 6

VALUTAZIONE DENSITOMETRICA DEL TRACCIATO  ELETTROFORETICO EMOGLOBINICO 11

VALUTAZIONE DENSITOMETRICA DEL TRACCIATO LIPOPROTEICO 13

COLORAZIONE CON SUDAN BLACK 15
 
 

SIEROPROTEINE 1

Valutazione densitometrica del tracciato sieroproteico ed approccio alla interpretazione molecolare della separazione elettroforetica. Elettroforesi su acetato di cellulosa

 L'interpretazione molecolare delle sieropro-teine frazionate costituisce, oggi, il metodo piu' efficace per la valutazione qualitativa delle singole individualità proteiche presenti nel tracciato elettroforetico; la valutazione quantitativa delle singole proteine  viene in-vece largamente eseguita con metodiche in turbidimetria, nefelometria, RID, dove la rea-zione positiva tra proteina ed antisiero mono-specifico garantisce la piu' accurata quantifi-cazione della proteina stessa.
In molti casi, tuttavia, la particolare natura di alcune proteine e/o la presenza di componenti proteiche abnormi non consentono ai soli metodi immunologici di dare una risposta quantitativa affidabile; quando infatti le proteine, a parità di specificità antigeniche, differiscono tra loro per caratteristiche chimico-fisiche è necessario, per la loro quantificazione,  ricorrere nuovamente alla tecnica elettroforetica in modo  che  le frazioni fisicamente separate ed opportunamente evidenziate possano final-mente essere quantificate densitometricamente.
Peraltro, per i complessi fenomeni chimico-fisici che regolano la separazione in campo elettrico delle proteine, i risultati analitici risentono spesso di una variabilità eccessiva specie tra laboratori, che induce a standardiz-zarne strettamente le condizioni operative per migliorarne l'affidabilità.
Con quest'obiettivo, Diploid propone, dopo un accurato studio metodologico, le condizioni operative ottimali con l'uso dei suoi reagenti e strumentazioni per consentire una piu' corretta quantificazione delle sepa-razioni elettroforetiche.

REAGENTI E PREPARAZIONE

1)-Diploid Dry  strips MT40S1 2)-Tampone HR o  pH8,7 RV1111  3)-Colorante Rosso Ponceau S  RV1627 disponibile in sol. pronta all'uso 6 x 1000 ml - 6 x 500 ml - 6 x 250 ml 4)-Soluzione decolorante RV16R6 Pronto all'uso 6 x 1000 o in sol. concentrata 1 x 500ml concentrato 20x 5)-Soluzione diafanizzante RV16R4 disponibile in sol. pronta all'uso 6 x 1000 ml - 6 x 500 ml - 6 x 250 ml

Portare un flacone di tampone al volume di 1000 ml   con H2O deionizzata Idratare le strisce in tampone per 10'

DIPLOID Sezione Elettroforesi

DIPLOID S.r.l. - 06/54.13.816 - 02/54.54.476 -   i

MATERIALI E STRUMENTI

1)-Camera umida per elettroforesi                      HT10M1

2)-Applicatore semimicro per 8 campioni            HT10M3

3)-Applicatore semimicro per 4 campioni            HT10M4

4)-Alimentatore per elettroforesi                         HT10M8

5)-Vetrini per densitometria                                 CT10M1

6)-Cartoncini assorbenti                                      CT10M6

7) Sistema densitometrico  composto da PC, monitor, stampante ink jet,
scanner e software DPLSCAN

 Tipo di campione:
Siero, impiegato possibilmente entro 3 ore dal prelievo.

Fasi di lavoro semimicro/ Micro

Volume di campione nel pozzetto 20-50 µl semimicro/10-30 µl micro (secondo il tipo di applicatore)
Asciugatura striscia tra 2 cartoncini assorbenti
Volume di tampone in camera 400 ml
Prelevamento campioni  5"
Applicazione campioni 20"
N° applicazioni 1
Tensione  220 V
Tempo migrazione 25' semimicro/20' micro
Tempo colorazione 5-10'
Tempo decolorazione a vista (2-3 lavaggi, in totale circa 5')
Tempo diafanizzazione 1-2'
Tempo essiccamento a 90° 10'
Lettura densitometrica 525 nm